2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定

2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定細胞介紹

這株細胞是2001年從人胚腎細胞株293衍化而來。293細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質(zhì)粒pVgRXR轉(zhuǎn)染得到293pVgRXR細胞。隨后,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉(zhuǎn)染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來。載體包含SV40病毒序列。

2V6.11細胞株初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E434KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測。這株細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。

細胞特性
1） 來源：人胚胎腎臟
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。
6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。

                     
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗 1%
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務：

一、原代細胞服務
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
      原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等；
      原代細胞相關(guān)技術(shù)服務和整體實驗外包服務；

二、細胞株/系服務
      細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書；
      細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導；
      細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等；

三、iPS細胞
      iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）；
      iPS細胞增殖及冷凍保存；
      iPS基礎培養(yǎng)技術(shù)實習；
      新藥及實驗儀器上市前評估；

四、技術(shù)外包服務：各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等

五、其他：根據(jù)客戶需要定制服務等

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