人宮頸癌癌細胞HELA培養(yǎng)步驟是怎樣的？

　　人宮頸癌癌細胞HELA培養(yǎng)步驟是怎樣的？

　　

　　1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

　　

　　（1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；谷氨酰胺，2mM；雙抗，1%。

　　

　　（2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　

　　（3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　

　　2、細胞處理：

　　

　　（1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　

　　（2）HeLa人子宮頸癌細胞/STR鑒定/鏡像綺點（iCell）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　
 

　　對于人宮頸癌癌細胞HELA貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　

　　1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　

　　3、按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　

　　4、收到細胞后傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。

　　

　　人宮頸癌癌細胞HELA細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。