人胚腎細(xì)胞293T要如何研究？

　　人胚腎細(xì)胞293T，上皮狀，早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點(diǎn)的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2。該細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主。可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。

　　1、研究的對象是活細(xì)胞

　　在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

　　2、研究條件可以人為控制

　　pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

　　3、人胚腎細(xì)胞293T研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

　　通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

　　4、研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

　　采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

　　1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　2）人胚腎細(xì)胞293T細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。